Vitamin D phải trải qua một số quá trình chuyển hóa trong cơ thể trước khi cơ thể có thể sử dụng nó. Bắt đầu từ khi gan chuyển đổi vitamin D thành một hóa chất gọi được là 25-hydroxyvitamin D. Do đó, xét nghiệm 25-hydroxyvitamin D là cách tốt nhất để theo dõi nồng độ vitamin D trong cơ thể. Ngoài ra, đây cũng là chỉ số quan trọng để xác định tình trạng loãng xương và còi xương.